在线客服
客服电话
客服电话
优惠信息
细胞系服务
siRNA/shRNA/sgRNA
病毒包装
分子生物服务
分子生物产品
技术中心
关于我们
基因敲除单克隆细胞株构建技术原理
CRISPR-Cas9是基于细菌和古细菌适应性免疫系统开发的基因编辑技术。该系统包含一个可以特异性识别靶DNA序列的gRNA，和一个可以结合和编辑DNA的Cas9核酸酶，在gRNA的引导下，Cas9蛋白精确识别并切割目标DNA序列。Cas9蛋白中的两个核酸酶活性位点分别切割靶序列中的两条链［一个核酸酶活性位点作用于一条链］，产生双链断裂（DSB） 。双链断裂通常通过非同源末端连接（NHEJ）来修复，在修复过程中，常常会产生非三倍数的插入或缺失（indel），导致移码突变，造成靶基因失活，从而实现基因敲除。
相比于会残留部分基因功能的RNA干扰技术，基因敲除可以将基因功能完全消除，所以已经被越来越多地用于基因功能研究中。
我们采用CRISPR-Cas9技术构建的基因敲除单克隆细胞株，可实现对细胞基因组靶位点的永久敲除。
服务内容 | 交付内容 | 周期 | 价格 |
1. 预实验： 细胞转导测试、抗性筛选测试、单克隆生长测试 | 1、单克隆细胞株：2个T25瓶（10^6个细胞/瓶） 2、结题报告：质粒构建、克隆筛选、敲除鉴定等操作和结果 | 6-10周 | |
2. 正式实验： gRNA序列设计、cas9-gRNA载体构建、转染细胞、多克隆细胞株筛选、单克隆细胞株筛选、敲除效率验证、细胞扩大培养和保存 |
基因敲除单克隆细胞株构建 * 服务优势
|
|
|
效果保障，不成功不收费 无效全额退款，100%保证目标基因编辑/表达效果 | 效率保障 快至6周即可交付合格细胞株，高效实验流程 | 售后保障 实验疑问随时快速响应，专业技术团队全程跟进 |
本案例在人HCT116细胞中进行基因编辑，电转后筛选获得的单克隆细胞，通过PCR和Sanger测序验证表明，该细胞在sgRNA2和sigRNA3靶位点分别发生缺失1个碱基的纯合突变，可引起移码敲除。Western-Blot实验确认了敲除结果。
Sanger测序结果图
Western-Blot检测结果图
