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慢病毒包装
产品介绍
慢病毒载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达，可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的基因治疗效果，具有广阔的应用前景。
慢病毒包装流程
客户提供
1. 质粒/菌液以及载体图谱；
2. 滴度/体积要求。
交付标准
1. 实验组病毒液和对照病毒液；
2. 病毒荧光/qPCR检测报告。
案例解析
慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，因此具有广阔的应用前景。
案例1：
本文研究中，作者通过环状RNAs测序，在人类ICC组织中鉴定出circNFIB (hsa_circ_0086376，以下简称cNFIB)。并进行了一系列的体外和体内实验，探讨cNFIB对MEK抑制剂曲美替尼抗肿瘤活性的影响。
研究结果表明，与曲美替尼和编码cNFIB的慢病毒载体共治疗比单独的曲美替尼治疗表现出更大的抑制作用。
案例2：
Neuro-oncology杂志（IF=10.247）在线发表了中山大学附属第一医院张弩教授最新的研究成果，报道发现EGFR来源的circRNA可以特殊的滚环翻译和程序化-1核糖体移码（-1PRF）诱导的框外终止密码子（OSC），形成一系列的滚动翻译EGFR（rtEGFR）。rtEGFR可以结合并稳定EGFR，在成人胶质母细胞瘤（GBM）成瘤和Nimotuzumab药敏相关。
在本文研究中，研究者使用慢病毒转染的稳定细胞系用于评估rtEGF蛋白在体外和体内的生物学功能。研究结果显示circEGFR在GBM标本中高表达，circEGFR翻译生成的rtEGFR具有促进BTIC细胞成瘤的能力，干扰circEGFR后抑制成瘤速度。
参考文献：
[1] Jinpeng Du,Tian Lan,Haotian Liao , et al.CircNFIB inhibits tumor growth and metastasis through suppressing MEK1/ERK signaling in intrahepatic cholangiocarcinoma Mol Cancer.(2022).10.1186/s12943-021-01482-9.
[2] Y. Liu, Z. Li, M. Zhang, H. Zhou, X. Wu, J. Zhong, F. Xiao, N. Huang, X. Yang, R. Zeng, L. Yang, Z. Xia, N. Zhang, Rolling-translated EGFR Variants Sustain EGFR Signaling and Promote Glioblastoma Tumorigenicity,Neuro Oncol(2020). 10.1093/neuonc/noaa279.
结果展示
一. 慢病毒感染293T 细胞荧光图
感染48h的细胞图
视野 | 明场图 | 荧光图 |
视野1 |
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视野2 |
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qPCR检测病毒滴度
内参的标准曲线：
病毒基因的标曲：
病毒基因的溶解曲线：
病毒滴度结果：
平均每个细胞所含病毒基因数（M1）=病毒基因拷贝数/内参基因拷贝数
病毒滴度（TU/ml）=（细胞数×稀释倍数×M1）/添加病毒体积（mL）×校正系数×1000
病毒名称 | 内参基因copies | 病毒基因copies | M1 | 细胞数 | 滴度（TU/ml） |
hsa_circ_××× | ××E+03 | ××E+04 | ×× | ××E+05 | ××E+08 |
××E+03 | ××E+04 |
